培養(yǎng)基制備的流程
發(fā)布時間：
2023-08-04
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培養(yǎng)基制備的流程
培養(yǎng)基是一種具有特定生物學功能的液體或固體。細胞的培養(yǎng)需要通過各種培養(yǎng)條件才能達到理想的效果，因此，培養(yǎng)基對于培養(yǎng)微生物、植物和動物器官和組織都有重要作用。由于生物多樣性和細胞種類的多樣性，微生物的培養(yǎng)需要各種特定成分來支持其生長，并與生物體內(nèi)各種不同物質(zhì)共同構(gòu)成一個生物體系。在進行各種生物研究時往往要使用不同種類的細胞，而這些細胞必須在適當?shù)臈l件下才能生長繁殖。
1、準備工作
制作培養(yǎng)基需要將各種原料混合在一起，并且要準備好足夠的溫度。常用的是淀粉、蔗糖和甘油，而有些則用木糖或蔗糖代替淀粉來制作。將所有原料進行混合后再進行加工制備，可以得到不同成分比例的培養(yǎng)基。通常一種配方可以同時使用多種原料制作培養(yǎng)基：如葡萄糖、蔗糖和纖維素（無菌狀態(tài)）均可以與不同的原料混合制作。
2、制作過程
先稱取原料，稱量其質(zhì)量，再根據(jù)品種、數(shù)量和所需成分分別稱量并裝入不同的容器中，用蒸餾水或蒸餾水調(diào) pH值為2~4。然后用蒸餾水沖洗、洗滌，將所有雜質(zhì)都洗凈，再用蒸餾水洗至無沉淀為止。
3、儀器準備
培養(yǎng)基的制備通常使用的儀器有高壓滅菌鍋、冷凍干燥機和電子天平。其中冷凍干燥的目的是為了防止微生物在干燥過程中受到損傷，并有利于在后續(xù)的實驗中繼續(xù)使用；電子天平是一種精密量具，用來稱量試劑、材料或樣品的重量。
一般實驗室使用的低溫箱（-40℃）是由一個玻璃管狀容器和一個玻璃棒組成的，用來貯存試劑和樣品。通常情況下低溫箱（-40℃）內(nèi)含有一套干燥器，用來將實驗樣品在室溫下干燥。為了便于使用操作及保存，一般采用真空保存方法。電子天平主要用于測定固體材料或液體在規(guī)定條件下的質(zhì)量。
4、制作步驟
制備培養(yǎng)基的步驟有以下幾個方面：
a、稱取原料，根據(jù)需要稱取相應(yīng)數(shù)量的材料。
b、稱量，計算用量。
c、稱量，計算時注意稱量要準確。
d、滅菌，是制備培養(yǎng)基的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。
5、滅菌處理
滅菌處理是對培養(yǎng)基進行檢驗、分析和鑒定的關(guān)鍵步驟。在滅菌過程中，必須嚴格控制滅菌溫度、時間、壓力和滅菌室的通風狀況。否則，會導致細胞損傷以及培養(yǎng)基中有害物質(zhì)污染。
6、保存步驟
（1）取少量液體，放入小瓶中，加入適量的無菌水，使液體完全淹沒瓶口。
（2）將瓶口的蓋子蓋上，再將小瓶倒入培養(yǎng)基中，靜置片刻后放入冰箱冷藏（或冷凍）備用。
（3）每次用完都要認真清洗器皿和瓶身。
（4）每天取出小瓶后，需用75%乙醇對培養(yǎng)基進行清洗，去除表面殘留的無菌水及雜質(zhì)。
7、裝瓶程序
將準備好的各配方裝瓶，裝瓶時注意要有空氣，不能有任何液體流入到瓶口處。在裝瓶之前應(yīng)進行滅菌操作；裝瓶過程中應(yīng)仔細觀察瓶子內(nèi)的液體流動情況，及時補充培養(yǎng)基；避免將液體漏入到另一個瓶口。
8、裝瓶方法
用手握住瓶口，將培養(yǎng)基倒入瓶中，一般采用二次攪拌或三次攪拌；將瓶口擰緊（注意瓶子的邊緣不要被瓶口的蓋子擋?。古囵B(yǎng)基不受污染。
9、滅菌和消毒過程中的質(zhì)量控制過程
滅菌和消毒過程中，首先要嚴格按照滅菌和消毒操作規(guī)程進行，要根據(jù)不同的菌種對消毒條件的要求，制定相應(yīng)的檢測方案。
10、產(chǎn)品出廠檢驗程序
產(chǎn)品出廠檢驗程序：對產(chǎn)品進行外觀、數(shù)量檢驗。
11、產(chǎn)品使用說明書的編寫程序
根據(jù)需要選擇培養(yǎng)基的配方，并編寫產(chǎn)品使用說明書（包括用途、配制方法、注意事項等），內(nèi)容應(yīng)充分說明所用原料的性質(zhì)和用法。
12丶保存條件及有效期
在-20℃以下保存，有效期為一年，低于-10℃保存需要重新配制；使用前需搖勻。
13丶注意事項
1丶培養(yǎng)基使用前必須用溫水徹底清洗，并充分加熱，以防污染。
2丶培養(yǎng)基制備過程中，應(yīng)定期檢查各部件是否有破損、漏液情況，如有破損應(yīng)及時更換。
3丶使用過程中，培養(yǎng)基內(nèi)不得添加任何防腐劑、著色劑或食品添加劑。
4丶要保持培養(yǎng)皿內(nèi)干燥清潔，避免因干燥而影響生物活性物質(zhì)的釋放；培養(yǎng)基中不得加入任何溶劑或酸類。
5丶要注意實驗中所用液體的 PH值，避免 PH值過低將影響生物活性物質(zhì)的釋放和降解；要注意培養(yǎng)基的溶解度和 pH值變化。